Съхранение и работа с пептиди
Лиофилизираният пептид е стабилно твърдо вещество и крехък разтвор. Повечето проблеми възникват в десетте минути между отварянето на флакона и замразяването на аликвотите. Това е протоколът, който следваме и ние.
Съхранение на лиофилизирания флакон
Дръжте го запечатан при −20 °C, на сухо и защитен от светлина; при −80 °C за многогодишно съхранение. Така съхраняван, лиофилизираният пептид е стабилен години наред. Няколко дни при стайна температура по време на транспорт не вредят на сухото вещество — затова лиофилизираните флакони се изпращат без лед.
Преди отваряне
Оставете флакона да достигне стайна температура — около 30 минути на работната маса — преди да разкъсате печата. Студен флакон, отворен във влажен въздух, кондензира вода върху праха; лиофилизираните пептиди са хигроскопични и тази вода е първото, което скъсява срока им на годност и изкривява всяко претегляне.
Избор на разтворител
Стерилна или бактериостатична вода разтваря повечето изследователски пептиди. Когато не успее, решава нетният заряд: основен пептид (Lys, Arg, His превишават Asp, Glu) се разтваря в 10 % оцетна киселина; кисел — в малко 10 % амониев бикарбонат; много хидрофобен — в минимален обем DMSO, след което се разрежда с буфер. Нашият калкулатор дава нетния заряд при pH 7 за всяка последователност.
Разтваряне
Пуснете разтворителя бавно по вътрешната стена на флакона, никога директно върху пептидната „питка“, и разклатете леко. Не вортексирайте — пяната денатурира и агрегира пептидите. Ако остане мътност, обработете за минута с ултразвук или затоплете за кратко до 30 °C. Работете при концентрацията, която ще използвате; разредените изходни разтвори се съхраняват по-зле от концентрираните.
След разтваряне
Използвайте в рамките на няколко дни при 2–8 °C. За по-дълго разделете на еднократни аликвоти и замразете при −20 °C — никога не замразявайте повторно размразена аликвота. Последователности с Cys, Met или Trp се окисляват в разтвор, а тези с Asn или Gln се деамидират, така че се съхраняват най-зле; пригответе ги пресни.
Разчитане на противойона
Лиофилизираният пептид е сол — обикновено на трифлуороцетна киселина (TFA) от пречистването или на оцетна киселина при поискване — и солта е част от масата на етикета. Пет милиграма TFA сол с чистота 95 % не са пет милиграма пептид; калкулаторът показва нетната стойност за вашата последователност. TFA има и биологично значение: при по-високи концентрации е цитотоксична в клетъчни анализи, поради което при синтеза може да се зададе замяна с ацетат или HCl.
Документите, които го придружават
Номерът на партидата на флакона е същият като в сертификата за анализ и във вашата фактура. Сертификатът отчита тестовете за класа, който сте закупили — най-малко чистота по HPLC и идентичност по MS — а информационният лист за безопасност е за всяко съединение. И двата са на продуктовата страница и в архива на сертификатите.