Skladování a zacházení s peptidy
Lyofilizovaný peptid je stabilní pevná látka a křehký roztok. Většina problémů vznikne během deseti minut mezi otevřením lahvičky a zamražením alikvotů. Toto je protokol, který dodržujeme sami.
Skladování lyofilizované lahvičky
Uchovávejte ji uzavřenou při −20 °C, v suchu a chráněnou před světlem; při −80 °C pro dlouholeté skladování. Takto uchovávaný lyofilizovaný peptid je stabilní roky. Několik dní při okolní teplotě během přepravy suché pevné látce neuškodí — proto se lyofilizované lahvičky zasílají bez ledu.
Před otevřením
Nechte lahvičku vytemperovat na pokojovou teplotu — asi 30 minut na stole — než porušíte uzávěr. Studená lahvička otevřená ve vlhkém vzduchu kondenzuje vodu na prášek; lyofilizované peptidy jsou hygroskopické a právě tato voda první zkracuje jejich trvanlivost a zkresluje každé vážení.
Volba rozpouštědla
Sterilní nebo bakteriostatická voda rozpustí většinu výzkumných peptidů. Když ne, rozhoduje čistý náboj: bazický peptid (Lys, Arg, His převažují nad Asp, Glu) se rozpustí v 10% kyselině octové; kyselý v troše 10% hydrogenuhličitanu amonného; velmi hydrofobní v nejmenším objemu DMSO a poté se ředí pufrem. Náš kalkulátor udává čistý náboj při pH 7 pro jakoukoli sekvenci.
Rekonstituce
Rozpouštědlo pouštějte pomalu po vnitřní stěně lahvičky, nikdy přímo na lyofilizát, a krouživě promíchejte. Nevortexujte — pěnění peptidy denaturuje a agreguje. Zůstane-li zákal, minutu sonikujte nebo krátce zahřejte na 30 °C. Pracujte v koncentraci, kterou použijete; zředěné zásobní roztoky se uchovávají hůře než koncentrované.
Po rekonstituci
Spotřebujte do několika dnů při 2–8 °C. Na delší dobu rozdělte do jednorázových alikvotů a zamrazte při −20 °C — rozmražený alikvot nikdy znovu nezamrazujte. Sekvence s Cys, Met nebo Trp v roztoku oxidují a ty s Asn nebo Gln deamidují, takže se uchovávají nejhůř; připravujte je čerstvé.
Čtení protiiontu
Lyofilizovaný peptid je sůl — obvykle kyseliny trifluoroctové (TFA) z čištění, nebo na přání kyseliny octové — a tato sůl je součástí hmotnosti na etiketě. Pět miligramů TFA soli o čistotě 95 % není pět miligramů peptidu; kalkulátor ukáže čistou hodnotu pro vaši sekvenci. TFA má i biologický význam: ve vyšších koncentracích je v buněčných testech cytotoxická, proto lze při syntéze zadat výměnu za acetát nebo HCl.
Dokumentace, která ho provází
Číslo šarže na lahvičce je totéž číslo šarže na certifikátu analýzy a na vaší faktuře. Certifikát uvádí zkoušky třídy, kterou jste koupili — přinejmenším čistotu HPLC a identitu MS — a bezpečnostní list je na sloučeninu. Oba najdete na stránce produktu a v archivu certifikátů.