Čuvanje i rukovanje peptidima
Liofilizirani peptid stabilna je krutina i krhka otopina. Većina problema nastaje u deset minuta između otvaranja bočice i zamrzavanja alikvota. Ovo je protokol koji i sami slijedimo.
Čuvanje liofilizirane bočice
Čuvajte je zatvorenu na −20 °C, na suhom i zaštićenu od svjetla; na −80 °C za višegodišnje čuvanje. Tako čuvan liofilizirani peptid stabilan je godinama. Nekoliko dana na sobnoj temperaturi tijekom prijevoza ne šteti suhoj krutini — zato se liofilizirane bočice šalju bez leda.
Prije otvaranja
Pustite da bočica dosegne sobnu temperaturu — oko 30 minuta na stolu — prije nego što slomite pečat. Hladna bočica otvorena u vlažnom zraku kondenzira vodu na prah; liofilizirani peptidi su higroskopni i ta voda prva skraćuje njihov rok trajanja i kvari svako vaganje.
Odabir otapala
Sterilna ili bakteriostatska voda otapa većinu istraživačkih peptida. Kad ne uspije, odlučuje neto naboj: bazični peptid (Lys, Arg, His brojniji od Asp, Glu) otapa se u 10 % octenoj kiselini; kiseli u malo 10 % amonijeva bikarbonata; vrlo hidrofobni u najmanjem volumenu DMSO-a, zatim se razrjeđuje puferom. Naš kalkulator daje neto naboj pri pH 7 za bilo koju sekvencu.
Rekonstitucija
Otapalo puštajte polako niz unutarnju stijenku bočice, nikad izravno na liofilizat, i lagano zakružite. Ne vorteksirajte — pjenjenje denaturira i agregira peptide. Ako zamućenje ostane, sonicirajte minutu ili kratko zagrijte na 30 °C. Radite u koncentraciji koju ćete koristiti; razrijeđene matične otopine čuvaju se lošije od koncentriranih.
Nakon rekonstitucije
Iskoristite u nekoliko dana na 2–8 °C. Za dulje razdijelite u jednokratne alikvote i zamrznite na −20 °C — nikad ne zamrzavajte ponovno odmrznuti alikvot. Sekvence s Cys, Met ili Trp oksidiraju u otopini, a one s Asn ili Gln deamidiraju, pa se čuvaju najlošije; pripremite ih svježe.
Čitanje protuiona
Liofilizirani peptid je sol — obično trifluoroctene kiseline (TFA) iz pročišćavanja ili octene kiseline na zahtjev — i sol je dio mase na etiketi. Pet miligrama TFA soli čistoće 95 % nije pet miligrama peptida; kalkulator prikazuje neto iznos za vašu sekvencu. TFA je važna i biološki: u višim koncentracijama citotoksična je u staničnim testovima, zbog čega se pri sintezi može zatražiti zamjena za acetat ili HCl.
Dokumentacija koja ga prati
Broj lota na bočici isti je broj lota na certifikatu analize i na vašem računu. Certifikat izvještava o ispitivanjima klase koju ste kupili — najmanje čistoća HPLC i identitet MS — a sigurnosno-tehnički list vrijedi po spoju. Oba su na stranici proizvoda i u arhivi certifikata.