Przechowywanie i postępowanie z peptydami
Liofilizowany peptyd jest stabilnym ciałem stałym i nietrwałym roztworem. Większość problemów powstaje w ciągu dziesięciu minut między otwarciem fiolki a zamrożeniem porcji. To protokół, którego sami przestrzegamy.
Przechowywanie fiolki z liofilizatem
Przechowuj zamkniętą w −20 °C, w suchym miejscu i z dala od światła; w −80 °C do przechowywania wieloletniego. Tak przechowywany liofilizowany peptyd jest stabilny przez lata. Kilka dni w temperaturze otoczenia podczas transportu nie szkodzi suchemu ciału stałemu — dlatego fiolki z liofilizatem wysyłane są bez lodu.
Przed otwarciem
Pozwól fiolce osiągnąć temperaturę pokojową — około 30 minut na blacie — zanim zerwiesz plombę. Zimna fiolka otwarta w wilgotnym powietrzu skrapla wodę na proszku; liofilizowane peptydy są higroskopijne, a ta woda jako pierwsza skraca ich trwałość i fałszuje każde ważenie.
Dobór rozpuszczalnika
Woda sterylna lub bakteriostatyczna rozpuszcza większość peptydów badawczych. Gdy to nie wystarcza, decyduje ładunek netto: peptyd zasadowy (Lys, Arg, His przeważają nad Asp, Glu) rozpuszcza się w 10 % kwasie octowym; kwaśny — w niewielkiej ilości 10 % wodorowęglanu amonu; bardzo hydrofobowy — w najmniejszej objętości DMSO, a następnie rozcieńcza buforem. Nasz kalkulator podaje ładunek netto przy pH 7 dla dowolnej sekwencji.
Rekonstytucja
Wprowadzaj rozpuszczalnik powoli po wewnętrznej ściance fiolki, nigdy na liofilizat, i delikatnie mieszaj ruchem okrężnym. Nie wortexuj — pienienie denaturuje i agreguje peptydy. Jeśli pozostaje zmętnienie, sonikuj przez minutę lub krótko ogrzej do 30 °C. Pracuj w stężeniu, którego użyjesz; rozcieńczone roztwory wyjściowe przechowują się gorzej niż stężone.
Po rekonstytucji
Zużyj w ciągu kilku dni w 2–8 °C. Na dłużej podziel na porcje jednorazowe i zamroź w −20 °C — nigdy nie zamrażaj ponownie rozmrożonej porcji. Sekwencje z Cys, Met lub Trp utleniają się w roztworze, a te z Asn lub Gln ulegają deamidacji, dlatego przechowują się najgorzej; przygotowuj je na świeżo.
Odczytywanie przeciwjonu
Liofilizowany peptyd jest solą — zwykle kwasu trifluorooctowego (TFA) z oczyszczania lub kwasu octowego na życzenie — a sól stanowi część masy podanej na etykiecie. Pięć miligramów soli TFA o czystości 95 % to nie pięć miligramów peptydu; kalkulator pokazuje wartość netto dla Twojej sekwencji. TFA ma też znaczenie biologiczne: w wyższych stężeniach jest cytotoksyczny w testach komórkowych, dlatego przy syntezie można zamówić wymianę na octan lub HCl.
Dokumentacja, która mu towarzyszy
Numer partii na fiolce jest tym samym numerem, który widnieje na certyfikacie analizy i na Twojej fakturze. Certyfikat raportuje badania klasy, którą kupiłeś — co najmniej czystość HPLC i tożsamość MS — a karta charakterystyki jest przypisana do związku. Oba dokumenty są na stronie produktu i w repozytorium CoA.